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Integrantes

GARAY NOVILLO, Javier

Becario doctoral de CONICET
Directora: José Luis Barra
E-Mail: jgaraynovillo@gmail.com

Tema de Tesis

Ingeniería metabólica en bacterias ácido lácticas
El objetivo general del presente proyecto es desarrollar e implementar procesos genético-moleculares que nos permitan utilizar a las Bacterias Ácido Lácticas (BAL), consideradas como GRAS (Generally Recognized As Safe), como biofactorías para la producción de compuestos de interés alimenticio y/o industrial; ya sea a partir de la inserción de genes o de vías metabólicas clonados en plásmidos o insertados en el ADN cromosomal. Como objetivos particulares se propone:
1. Generación de librería de promotores bifuncionales en Escherichia coli y Lactococcus lactis a partir de fragmentos de ADN genómico de L. lactis con actividad promotora, que dirijan diferentes niveles de expresión de genes o vías metabólicas de interés.
2. Diseño y construcción de sistemas de expresión poli-génicos para la expresión de vías metabólicas en BAL. A partir del análisis de regiones promotoras, RBS y uso de codones, entre otras, generaremos diferentes construcciones plasmídicas con el objeto de lograr la producción de metabolitos secundarios de interés en BAL. Se expresarán carotenoides como modelo de estudio.
3. Diseño e implementación del sistema CRISPR-Cas9 para la edición eficiente de genomas de BAL: Se construirá un vector único que contenga todos los elementos necesarios para utilizar el sistema CRISPR-Cas9 en la edición del genoma de L. lactis. Se espera generar nuevas herramientas para el uso de BAL como biofactorías y en un futuro cercano el mejoramiento de cepas de BAL de uso industrial.

PhD Thesis Topic

Metabolic engineering in lactic acid bacteria
The main objective of this project is to develop genetic and biotechnological tools to accomplish the use of Lactic Acid Bacteria (LAB), known as GRAS (Generally Recognized As Safe) organisms, as cell factories for the production of high-value metabolites for food and Biotech industries, either by cloning single genes or metabolic pathways into plasmids or into the genome. As specific objectives we propose:
1. Construction of a shuttle promoter library for Escherichia coli and Lactococcus lactis using L. lactis genomic fragments with promoter activity, which could lead different levels of expression of genes or metabolic pathways of interest.
2. Design and implementation of polygenic expression systems of metabolic pathways in LAB. Aiming the production of secondary metabolites of interest in LAB, we will study the use of suitable promoter regions, RBS and codon usage, among others, into plasmidic constructions. We will express carotenoids as a case study.
3. Design of CRISPR-Cas9 system for efficient LAB genome editing: We will put together into a single plasmid all the elements to implement CRISPR-Cas9 system for L. lactis genome editing. We expect not only to develop new key tools to use LAB as cell factories but also to accomplish the genetic improvement of industrial LAB strains.